Hola, todos. Agradecer tú para unión mi hablar. I soy Julia Lametete, Soy a Sénior Científico en AstraZeneca. I trabajar en biofarmacéutica desarrollo en el analítico ciencia equipo. Hoy, I desear a hablar A usted acerca de el usar de Gama para el desarrollo de analítico caracterización métodos, mayoría especialmente cromatografía métodos.
En de hoy hablar, Soy yendo a hablar acerca de terapéutico proteínas, qué ellos son, y por qué ellos son desafiante para analítico pruebas, y introducir tú a el usar de diseño de experimento para analítico método desarrollo y el solicitud de Gama para el desarrollo de cargar diferencia método, específicamente catión intercambio cromatografía método.
A comenzar apagado, proteína terapéutica son inherentemente muy complejo pendiente a su más grande tamaño y el presencia de el post- traslacional modificación, y también químico modificaciones eso poder el proteína someterse a través de durante el procesos de expresión en células, purificación, y almacenamiento.
Monoclonal anticuerpos dominar el biofarmacéutica mercado, representando acerca de 70 % de el total ventas de biofarmacéutica productos. Sin embargo, recientemente, allá es a empujar para nuevo productos, próximo generación productos biofarmacéuticos, cual son biespecífico anticuerpos, anticuerpo fragmento, fusión proteínas, y muchos otro formatos. Todo de a ellos venir con único desafíos pendiente a su complejo estructura y presencia de más alto orden estructura, glico formas, cargar variantes, el sulfato cautiverio, oxidado desamidado especies, isomerización, agregación, fragmentación.
A todos de estos modificación, químico proceso [inaudible 00:02:37] modificación, poder impacto en potencia, seguridad, calidad de el final droga producto. Este es por qué exhaustivo analítico caracterización y analítico pruebas a lo largo de todo el etapas de producto vida ciclo es llave a encontrarse regulador normas, a ser activado a entregar a producto eso se reúne regulador calidad perfil.
Nosotros usar a plétora de analítico técnicas para analizando proteínas, y estos son basado principalmente en cromatografía métodos, electroforético métodos, y [inaudible 00:03:25] . Pendiente a el inherente estructural complejidad de proteínas, analítico método desarrollo poder ser bastante desafiante.
En de hoy hablar, Soy yendo a específicamente hablar acerca de cromatografía métodos y el usar de diseño de experimento a ayuda el desarrollo de cromatografía separación. Cromatografía método poder ser bastante complejo, especialmente si tú tener a complejo analito como a proteína. Este es porque el separación depende en el interacción de varios variables semejante como móvil fase composición, buffer pH, fluir tasa, columna química, temperatura, el tipo de detector eso tú decidir a usar para el análisis. Todo de estos parámetros necesidad a ser bien- sintonizado y revisado durante el separación proceso en orden a lograr el deseado separación. Gama poder ser muy útil versus uno factor en a tiempo acercarse.
Uno factor en a tiempo acercarse involucrado el variación de uno parámetro en a tiempo, manteniendo el otro constante. Este puede dirigir a a grande experimental correr, falta de información porque Hay falta de investigación en factores interacciones. Falta de información también dirige a adicional experimentos durante método validación, cual puede alargar incluso más el método desarrollo proceso y finalmente retardar el en general producto desarrollo.
Gama, en comparación a uno factor en a tiempo aproches, Gama permite el variación de múltiple parámetros en a tiempo. Este permitir, con a reducido número de experimentos, a investigar a grande número de factores, incluido el interacciones entre a ellos. También el desarrollo de matemático modelos eso permitir el evaluación de pertinencia y el estadístico significado a facilitar todo el pasos requerido durante método validación. Gama permite en realidad a investigar a ancho diseño espacio con menos recursos, entonces en a más eficiente forma. En hecho, I como dicho Gama permite más rápido, más económico, y más inteligente experimentos para entregar más fuerte y mejor analítico métodos.
En el día de hoy hablar, Soy yendo a hablar tú a través de a dividir Gama acercarse para el desarrollo de a catión intercambio cromatografía método. Catión intercambio cromatografía es usado para el análisis de cargar variantes. Específicamente, si tú ver aquí en el izquierda mano lado de este deslizar, tú poder ver a cromatograma de a proteína dónde tú poder ver alguno ácido especies aquí en el izquierda, [inaudible 00:07:17] en el izquierda de a principal especies cima, y alguno básico especies cima.
Todo estos ácido básico especies poder ser formado pendiente a el presencia de químico modificación eso poder dirigir a superficial cargar distribución variación en el proteína. Catión intercambio cromatografía métodos son bastante complejo cromatografía métodos porque el separación eficiencia es afectado por a número de factores y bastante sensible a pequeño cambios de estos factores semejante como columna química, móvil fase pH, temperatura, fluir tasa, contenido de sal, tiempo de el separación.
En este acercarse, Soy yendo a hablar tú a través de un eficiente forma a desarrollar catión intercambio cromatografía método usando Gama. Si tú son familiar con Gama, tú puede saber eso a menudo requiere a secuencial acercarse. En este experimento, I realizado a principal efectos cribado diseño para habilitante el selección de el mejor columna química y el móvil fase pH para el cargar diferencia separación de este específico mAb molécula.
Durante el segundo Gama, I usar respuesta superficie metodología, particularmente a central compuesto diseño Gama, a optimizar el cromatografía separación por cambio el fluir tasa y [inaudible 00:09:36] . Vamos llevar en más detalle en el primero Gama experimento. Este era a principal efectos cribado diseño dónde I examinado cuatro columna química compró por cuatro diferente proveedores, Agilent, Sepax, Phenomenex, y Aguas, y I examinado a rango de pH de 5.5 a 6.5.
Mi respuesta era el experimental cima capacidad, cual es a parámetro eso dice tú el eficiencia de a cromatográfico separación, precisamente el número de picos eso poder ser apartado dentro el cromatograma, el cromatografía tiempo eso tú colocar. Otro parámetros semejante como concentración de buffer, concentración de sal en el comenzar de el cromatografía gradiente, fluir tasa, gradiente tiempo, forma, temperatura, inyección volumen, concentración, y el UV absorbancia eran conservó constante.
Estos son el resultados para el primero Gama. En el izquierda mano lado, tú poder ver el cuatro diferente columna resultados. Tú poder ver cómo el experimental cima capacidad cambios versus el pH cambiar en el móvil fase en todo el cuatro diferente columnas. Tú poder ver eso nosotros apuntar a tener alto experimental cima capacidad valores. Tú poder ver eso el Phenomenex columna realizado mejor.
En todo de estos tres columnas, nosotros poder ver eso pH de 6.5 permite mayor que experimental cima capacidades. Pero el Phenomenex columna permitido para mejor separación resultados. Él es también visible en el bien mano lado de este deslizar en el panel A. Tú poder ver en pH 6.5, cómo el separación difiere cuando usando diferente cromatografía columnas.
Nosotros tener Agilent , Aguas , Phenomenex , y Sepax . Definitivamente, el separación de el cargar variantes usando el Phenomenex columna es mucho mejor que en el otros porque estos ácido picos son muy Bueno apartado como Bueno como estos básico especies aquí de el principal producto cima.
Panel B, nosotros tener aislado solo el resultados de el Phenomenex columna. Cómo el cromatografía separación era eso con el móvil fase o con pH 5.5, 6.0 y 6.5. Nosotros poder ver cómo el separación mejora con el aumentar en pH. Obviamente, el móvil fase pH es dictado por el intrínseco molécula pi. Nosotros podría solo investigar este rango. De lo contrario, el molécula quería tener luchó a encontrar es propio columna.
Basado en nuestro fundamental conocimiento de cromatografía separación con catión intercambio columnas, nosotros decidido eso este parámetro, entonces este Phenomenex columna y pH de 6.5, eran óptimo a llevar en desarrollo. Nosotros transportado en con el segundo Gama usando a central compuesto diseño.
Central compuesto diseño es a tipo de Gama descendente dentro el paraguas de respuesta superficie metodología, cual es usado para optimizado condiciones para investigar el presencia de curvatura, para instancia, y extrapolar óptimo valores. En este caso, nosotros usar nuestro Phenomenex columna y móvil fase pH de 6.5, y comenzó a jugar con otro parámetros semejante como buffer concentración, concentración de el sal en el comenzar de el gradiente, y fluir tasa a investigar óptimo condiciones.
Central compuesto diseño activado a muy eficientemente, con a pocos número de corre, a identificar óptimo separación condiciones, óptimo método condiciones. En hecho, en el muy fin de el dividir Gama acercarse, nosotros podría decir eso con el investigación de cuatro columna, móvil fase, pH rango, sal composición, gradiente fluir tasa. Con solo 27 experimental corre, nosotros podría optimizar a método para un anticuerpo monoclonal anticuerpo. Este método es muy útil porque él es ahora usado como a rápido, alto rendimiento cribado experimento. En a rápido, alto rendimiento analítico método para cribado diferencias en el cargar diferencia perfil de estos específico moléculas expresado en diferente condiciones y comparar él a a estándar.
Tú poder ver aquí eso el azul línea es nuestro referencia estándar y el rojo línea es a estrés material de el mismo molécula. Tú poder ver cómo el cargar diferencia perfil cambió como a consecuencia de el estrés condición aplicado a este molécula. Este era logrado gracias a este analítico método cual era desarrollado y optimizado con a Gama acercarse.
Nosotros también decidido a implementar este Gama acercarse como a plataforma flujo de trabajo para analítico método desarrollo para nuevo productos, nuevo era productos farmacéuticos y nosotros examinado a número de productos. Para todo de a ellos, nosotros aplicado primero el primero principal efecto pantalla diseño, y nosotros identificado el mejor columna y móvil fase pH a usar. En segundo lugar, nosotros aplicado el central compuesto diseño a optimizar el separación.
Ahora, nosotros tener identificado a plataforma columna y a móvil fase composición para este clase de terapéutica. Cuando nuevo moléculas llega en el tubería, nosotros poder muy rápidamente, justo por usando a central compuesto diseño, cual implica de hecho justo 12 corre, optimizar el cromatografía perfil y entregar un óptimo catión intercambio método para a específico producto.
El llave llevar- hogar mensajes de mi hablar hoy es eso Gama sistema método desarrollo seguido por adecuado estadístico análisis permite a plan experimento basado en tiempo, costo, y analítico recursos disponible muy eficientemente, y cronograma el ejecución de experimentos con adecuado muestra tipo y tamaño a extrapolar el máximo cantidad de información de nuestro químico datos y eficientemente DIRECCIÓN el desafíos y objetivos de el destinado investigación.
Él definitivamente ahorra tiempo y costo para experimento ejecución en comparación a uno factor en a tiempo aproches. Mayoría especialmente, él permite el complejidad de analítico método desarrollo, pero aún interrogando varios factor en a tiempo y estudiando el efecto de ambos individual método parámetros y el interacción en el dependiente variable.
Con de hoy hablar, I esperanza I inspirado tú a aplicar más Gama en su experimentos. Agradecer tú muy mucho, todos, para su atención. Si tú tener cualquier preguntas, sentir gratis a alcanzar afuera a a mí. Agradecer tú.
