Bonjour, tout le monde. Remercier toi pour adhésion mon parler. I suis Julia Lèche-toi, Je suis a Senior Scientifique à AstraZeneca. I travail dans biopharmaceutique développement dans le analytique science équipe. Aujourd'hui, I vouloir à parler pour vous à propos le utiliser de Biche pour le développement de analytique caractérisation méthodes, la plupart en particulier chromatographie méthodes.
Dans d'aujourd'hui parler, Je suis en allant à parler à propos thérapeutique protéines, quoi ils sont, et pourquoi ils sont stimulant pour analytique essai, et introduire toi à le utiliser de conception de expérience pour analytique méthode développement et le application de Biche pour le développement de charge variance méthode, spécifiquement cation échange chromatographie méthode.
À commencer désactivé, protéine thérapeutique sont intrinsèquement très complexe exigible à leur plus grand taille et le présence de le post- translationnel modification, et aussi chimique modifications que peut le protéine subir à travers pendant le processus de expression dans cellules, purification, et stockage.
Monoclonal anticorps dominer le biopharmaceutique marché, représentant à propos 70 % de le total ventes de biopharmaceutique produits. Cependant, récemment, là est a pousser pour nouveau produits, suivant génération produits biopharmaceutiques, lequel sont bispécifique anticorps, anticorps fragment, fusion protéines, et beaucoup autre formats. Tous de eux viens avec unique défis exigible à leur complexe structure et présence de plus haut commande structure, glyco formes, charge variantes, le sulfate obligations, oxydé désamidé espèces, isomérisation, agrégation, fragmentation.
A ll de ces modification, chimique processus [inaudible 00:02:37] modification, peut impact sur puissance, sécurité, qualité de le final médicament produit. Ce est pourquoi complet analytique caractérisation et analytique essai tout au long de tous le étapes de produit vie faire du vélo est clé à rencontrer réglementaire normes, à être activé à livrer a produit que rencontre réglementaire qualité profil.
Nous utiliser a pléthore de analytique techniques pour analyser protéines, et ces sont basé surtout sur chromatographie méthodes, électrophorétique méthodes, et [inaudible 00:03:25] . Exigible à le inhérent de construction complexité de protéines, analytique méthode développement peut être assez stimulant.
Dans d'aujourd'hui parler, Je suis en allant à spécifiquement parler à propos chromatographie méthodes et le utiliser de conception de expérience à aide le développement de chromatographie séparation. Chromatographie méthode peut être assez complexe, en particulier si toi avoir a complexe analyte comme a protéine. Ce est parce que le séparation dépend sur le réciproque de plusieurs variables tel comme mobile phase composition, tampon pH, couler taux, colonne chimie, température, le taper de détecteur que toi décider à utiliser pour le analyse. Tous de ces paramètres besoin à être bien- accordé et contrôlé pendant le séparation processus dans commande à atteindre le voulu séparation. Biche peut être très utile contre un facteur à a temps approche.
Un facteur à a temps approche impliqué le variation de un paramètre à a temps, maintenir le autre constante. Ce peut plomb à a grand expérimental courir, manque de information parce que il y a manque de enquête sur facteurs interactions. Manque de information aussi conduit à supplémentaire expériences pendant méthode validation, lequel peut allonger même plus le méthode développement processus et enfin retard le dans l'ensemble produit développement.
Biche, dans comparaison à un facteur à a temps approches, Biche permet le variation de multiple paramètres à a temps. Ce permettre, avec a réduit nombre de expériences, à enquêter a grand nombre de facteurs, y compris le interactions entre eux. Aussi le développement de mathématique modèles que permettre le évaluation de pertinence et le statistique importance à faciliter tous le mesures requis pendant méthode validation. Biche permet vraiment à enquêter a large conception espace avec moins ressources, donc dans a plus efficace chemin. Dans fait, I comme adage Biche permet plus rapide, moins cher, et plus intelligent expériences pour livrer plus fort et mieux analytique méthodes.
Aujourd'hui parler, Je suis en allant à parler toi à travers a diviser Biche approche pour le développement de a cation échange chromatographie méthode. Cation échange chromatographie est utilisé pour le analyse de charge variantes. Spécifiquement, si toi voir ici sur le gauche main côté de ce glisser, toi peut voir a chromatogramme de a protéine où toi peut voir quelques acide espèces ici sur le gauche, [inaudible 00:07:17] sur le gauche de a principal espèces culminer, et quelques basique espèces culminer.
Tous ces acide basique espèces peut être formé exigible à le présence de chimique modification que peut plomb à superficiel charge distribution variation dans le protéine. Cation échange chromatographie méthodes sont assez complexe chromatographie méthodes parce que le séparation efficacité est affecté par a nombre de facteurs et assez sensible à petit changements de ces facteurs tel comme colonne chimie, mobile phase pH, température, couler taux, contenu de sel, temps de le séparation.
Dans ce approche, Je suis en allant à parler toi à travers un efficace chemin à développer cation échange chromatographie méthode en utilisant Biche. Si toi sont familier avec Biche, toi peut savoir que souvent nécessite a séquentiel approche. Dans ce expérience, I effectué a principal effets dépistage conception pour permettre le sélection de le meilleur colonne chimie et le mobile phase pH pour le charge variance séparation de ce spécifique mAb molécule.
Pendant le deuxième Biche, I utiliser réponse surface méthodologie, particulièrement a central composite conception Biche, à optimiser le chromatographie séparation par changement le couler taux et [inaudible 00:09:36] . Allons-y prendre dans plus détail dans le d'abord Biche expérience. Ce était a principal effets dépistage conception où I projeté quatre colonne chimie acheté par quatre différent fournisseurs, Agilent, Sepax, Phénomenex, et Eaux, et I projeté a gamme de pH depuis 5.5 à 6.5.
Mon réponse était le expérimental culminer capacité, lequel est a paramètre que raconte toi le efficacité de a chromatographique séparation, précisément le nombre de pics que peut être séparé dans le chromatogramme, le chromatographie temps que toi ensemble. Autre paramètres tel comme concentration de tampon, concentration de sel à le commencer de le chromatographie pente, couler taux, pente temps, forme, température, injection volume, concentration, et le UV absorbance étaient gardé constante.
Ces sont le résultats pour le d'abord Biche. Sur le gauche main côté, toi peut voir le quatre différent colonne résultats. Toi peut voir comment le expérimental culminer capacité changements par rapport à le pH changement dans le mobile phase dans tous le quatre différent colonnes. Toi peut voir que nous but à avoir haut expérimental culminer capacité valeurs. Toi peut voir que le Phénoménex colonne effectué meilleur.
Dans tous de ces trois colonnes, nous peut voir que pH de 6,5 permet plus grand expérimental culminer capacités. Mais le Phénoménex colonne autorisé pour mieux séparation résultats. Il est aussi visible sur le droite main côté de ce glisser dans le panneau UN. Toi peut voir à pH 6,5, comment le séparation diffère quand en utilisant différent chromatographie colonnes.
Nous avoir Agilent , Eaux , Phénoménex , et Sepax . Certainement, le séparation de le charge variantes en utilisant le Phénoménex colonne est beaucoup mieux que dans le autres parce que ces acide pics sont très Bien séparé comme Bien comme ces basique espèces ici depuis le principal produit culminer.
Panneau B, nous avoir isolé seulement le résultats de le Phénoménex colonne. Comment le chromatographie séparation était que avec le mobile phase ou avec pH 5.5, 6.0 et 6.5. Nous peut voir comment le séparation améliore avec le augmenter en pH. Évidemment, le mobile phase pH est dicté par le intrinsèque molécule pi. Nous pourrait seulement enquêter ce gamme. Sinon, le molécule serait avoir a lutté à trouver c'est propre colonne.
Basé sur notre fondamental connaissance de chromatographie séparation avec cation échange colonnes, nous décidé que ce paramètre, donc ce Phénoménex colonne et pH de 6,5, étaient optimal à porter sur développement. Nous porté sur avec le deuxième Biche en utilisant a central composite conception.
Central composite conception est a taper de Biche chute dans le parapluie de réponse surface méthodologie, lequel est utilisé pour optimisé conditions pour enquêter le présence de courbure, pour exemple, et extrapoler optimal valeurs. Dans ce cas, nous utiliser notre Phénoménex colonne et mobile phase pH de 6,5 et commencé à jouer avec autre paramètres tel comme tampon concentration, concentration de le sel à le commencer de le pente, et couler taux à enquêter optimal conditions.
Central composite conception activé à très efficacement, avec a peu nombre de court, à identifier optimal séparation conditions, optimal méthode conditions. Dans fait, à le très fin de le diviser Biche approche, nous pourrait dire que avec le enquête de quatre colonne, mobile phase, pH gamme, sel composition, pente couler taux. Avec seulement 27 expérimental court, nous pourrait optimiser a méthode pour un monoclonal anticorps. Ce méthode est très utile parce que il est maintenant utilisé comme a rapide, haut débit dépistage expérience. Dans a rapide, haut débit analytique méthode pour dépistage différences dans le charge variance profil de ces spécifique molécules exprimé dans différent conditions et comparer il à a standard.
Toi peut voir ici que le bleu doubler est notre référence standard et le rouge doubler est a stresser matériel de le même molécule. Toi peut voir comment le charge variance profil modifié comme a conséquence de le stresser condition appliqué à ce molécule. Ce était réalisé merci à ce analytique méthode lequel était développé et optimisé avec a Biche approche.
Nous aussi décidé à mettre en œuvre ce Biche approche comme a plate-forme flux de travail pour analytique méthode développement pour nouveau produits, nouveau était produits pharmaceutiques et nous projeté a nombre de produits. Pour tous de eux, nous appliqué d'abord le d'abord principal effet écran conception, et nous identifié le meilleur colonne et mobile phase pH à utiliser. Deuxièmement, nous appliqué le central composite conception à optimiser le séparation.
Maintenant, nous avoir identifié a plate-forme colonne et a mobile phase composition pour ce classe de thérapeutique. Quand nouveau molécules vient dans le pipeline, nous peut très rapidement, juste par en utilisant a central composite conception, lequel implique en fait juste 12 court, optimiser le chromatographie profil et livrer un optimal cation échange méthode pour a spécifique produit.
Le clé prendre- maison messages depuis mon parler aujourd'hui est que Biche système méthode développement suivi par approprié statistique analyse permet à plan expérience basé sur temps, coût, et analytique ressources disponible très efficacement, et calendrier le exécution de expériences avec adéquat échantillon taper et taille à extrapoler le maximum montant de information depuis notre chimique données et efficacement adresse le défis et objectifs de le destiné recherche.
Il certainement sauvegardes temps et coût pour expérience exécution dans comparaison à un facteur à a temps approches. La plupart en particulier, il permet le complexité de analytique méthode développement, mais toujours interrogeant plusieurs facteur à a temps et étudier le effet de les deux individuel méthode paramètres et le interaction sur le dépendant variable.
Avec d'aujourd'hui parler, I espoir I inspiré toi à appliquer plus Biche dans ton expériences. Remercier toi très beaucoup, tout le monde, pour ton attention. Si toi avoir n'importe lequel questions, sentir gratuit à atteindre dehors à moi. Remercier toi.
