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Caratterizzazione del peso molecolare di un componente delle mandorle citotossico per le linee cellulari del cancro gastrointestinale (2020-US-EPO-612)

Steve Figard, direttore del Laboratorio di ricerca sul cancro, Bob Jones University
Evan Becker, studente della Bob Jones University
Luke Brown, studente della Bob Jones University
Emily Swager, studentessa, Bob Jones University
Rachel Westphal, studentessa della Bob Jones University

Il cancro del colon-retto è sia il terzo tumore più comune che la terza causa principale di morte per cancro. Precedenti studi condotti in questo laboratorio hanno dimostrato l'effetto citotossico in vitro delle mandorle sui tumori gastrointestinali umani. È stato preparato un estratto di mandorle e processato mediante una procedura di pseudodigestione al fine di simulare gli effetti che l'estratto avrebbe in un sistema fisiologico. Questo estratto ha dimostrato una citotossicità in vitro dose-dipendente sull'adenocarcinoma gastrico umano ed è risultato citotossico per un adenocarcinoma del colon-retto umano, ma non ha avuto alcun effetto su una linea cellulare epiteliale del colon umano sana.

L'estratto è stato filtrato attraverso filtri con cutoff di peso molecolare di 100.000 Da e 5.000 Da per stimare le dimensioni di eventuali molecole antitumorali, ed è stato riscontrato che le molecole responsabili avevano un peso molecolare inferiore a 5.000 Da. Inoltre, è stato preparato un estratto di polifenoli dalle mandorle, che ha mostrato effetti simili a quelli dell'estratto di mandorle intere. Si è concluso che gli agenti antitumorali sono probabilmente i polifenoli. Infine, quattro flavonoidi comunemente presenti nelle mandorle sono stati confrontati con l'estratto di polifenoli, e hanno mostrato una citotossicità simile.

Trascrizione generata automaticamente...

Oratore	Trascrizione
Evan Becker	Ciao, questo è il
	Gruppo di ricerca sul cancro del BJU del 2019.
	Mi chiamo Evan Becker e oggi con me ci sono Luke Brown,
	Emily Swagger, Rachel Westfall e noi siamo tutte sotto la supervisione del Dott. Stephen Figard presso il Dipartimento di Biologia della Bob Jones University.
	Il nostro articolo, la nostra presentazione, riguarda la caratterizzazione del peso molecolare di un componente delle mandorle citotossico per le linee cellulari del cancro gastrointestinale.
	Bene, passiamo all'introduzione.
	Il cancro del colon-retto è attualmente motivo di grande preoccupazione per la comunità medica, in quanto rappresenta la terza causa principale di morte per cancro sia per gli uomini che per le donne a livello nazionale.
	Precedenti ricerche condotte dal laboratorio oncologico della BJU hanno mostrato risultati promettenti, dimostrando che le mandorle hanno un effetto citotossico sul tumore del colon-retto LoVo in vitro.
	È stata inoltre utilizzata una procedura di pseudodigestione per un estratto di mandorla, al fine di simulare il funzionamento dell'estratto in un sistema fisiologico.
	È stato dimostrato che lo stesso estratto di mandorle induce una risposta dose-dipendente nella linea cellulare di adenocarcinoma gastrico umano AGS.
	Inoltre, questo estratto non causa effetti negativi sulla linea cellulare epiteliale del colon umano CCD, indicando che gli effetti citotossici delle mandorle non colpiscono le cellule sane.
	Facendo passare il nostro estratto di mandorle attraverso filtri con cut-off di peso molecolare rispettivamente di 100.000 Dalton e 5000 Dalton,
	Siamo stati in grado di determinare che le molecole presenti nelle mandorle che inducono l'insieme di effetti tossici devono essere più piccole di 5000 Dalton.
	Di conseguenza, si è stabilito che i polifenoli fossero una possibile causa dell'effetto citotossico e l'estratto di polifenoli è stato applicato alle mandorle con questo trattamento, mostrando effetti citotossici molto simili sulle linee cellulari tumorali.
	Penso che siamo pronti.
Rachel Westphal	Tra le linee cellulari che abbiamo utilizzato c'erano AGS, che rappresenta il cancro allo stomaco; LoVo, che rappresenta il cancro al colon; e CCD, che era la nostra linea cellulare normale.
	Abbiamo utilizzato il 5-fluorouracile come controllo positivo per la morte cellulare. E abbiamo utilizzato una pseudodigestione in vitro delle mandorle per simulare la digestione fisiologica...digestione fisiologica.
	Nel test di proliferazione cellulare WST, utilizziamo un lettore di piastre per determinare l'assorbanza e calcolare la percentuale di vitalità cellulare.
	Successivamente, per l'analisi statistica è stato utilizzato JMP, in particolare l'analisi ANOVA, il test HSD di Tukey-Kramer e il test di Wilcoxon, oltre a un confronto non parametrico. I valori di p inferiori a 0,05 sono stati considerati statisticamente significativi.
	Si può passare alla diapositiva successiva. Sì.
Luke Brown	Bene. La prima serie di test che vorrei presentarvi riguarda la linea cellulare tumorale umana AGS, in particolare un carcinoma gastrico umano adenocarcinoma.
	JMP si è rivelato uno strumento importante per noi perché ci ha aiutato, innanzitutto, a determinare la deviazione standard in alcuni studi pilota che abbiamo condotto.
	Questo ci ha quindi permesso di utilizzare il software per eseguire un'analisi di potenza al fine di determinare la dimensione del nostro campione. Ora, osservando alcuni dei dati che abbiamo ottenuto qui,
	Innanzitutto, noterete che tra la Figura 1 e la Figura 2 ciò che hanno in comune è la soluzione salina tamponata con fosfato (PBS) e il 5-FU o 5-fluorouracile,
	che è un trattamento oncologico ben documentato e consolidato per tumori come quelli gastrici e del colon-retto. Ora vorrei richiamare la vostra attenzione sulla Figura 1.
	Precedenti studi condotti nel nostro laboratorio avevano già stabilito che l'estratto di mandorle sembra avere un certo effetto citotossico selettivo nei confronti di queste linee cellulari tumorali.
	Bene, speriamo di stabilire nella Figura 1 qui, prima di tutto, l'effetto del dosaggio. E in secondo luogo, volevamo restringere
	Quale peso molecolare dovremmo esaminare per stabilire quale composto o quali composti sono responsabili di questo effetto.
	Come potete vedere, passando dall'estratto di mandorle al 12% fino all'estratto di mandorle al 100%, si osserva una risposta dose-dipendente. Siamo stati in grado di dimostrarlo utilizzando il test HSD di Tukey-Kramer all'interno di JMP, che ha permesso di stabilire che questi gruppi presentano differenze statisticamente significative.
	Ora vedi che sia il filtro di taglio del peso molecolare di 100.000 che il filtro di taglio del peso molecolare inferiore a 5000
	sono statisticamente identici all'estratto di mandorla al 100%. Questo ci ha portato a credere che il composto o i composti responsabili di questo effetto siano relativamente piccoli, con un'energia inferiore a 5.000 Dalton.
	Alla luce di ciò, siamo passati alla Figura 2 e abbiamo esaminato alcune ricerche che dimostrano come i flavonoidi abbiano un effetto simile nelle noci.
	cianidina, delfinidina, malvidina e petunidina.
	Come potete vedere, sia l'estratto che tutti questi flavonoidi si sono rivelati più efficaci del 5-FU in questo trattamento.
	Alla luce di queste informazioni, passo la parola a Emily, che vi fornirà ulteriori dettagli su un altro set di dati.
Emily	Per assicurarci di non esaminare solo i risultati specifici di AGS, abbiamo analizzato anche un'altra linea cellulare tumorale chiamata LoVo. LoVo è una linea cellulare di cancro al colon.
	Come potete vedere, non abbiamo effettuato tutti i trattamenti di dosaggio estensivo su questo particolare, perché lo avevamo già dimostrato con AGS. Ci stavamo concentrando in particolare su
	Questo è un problema specifico di una determinata linea? Ad esempio, per LoVo, si può notare che non abbiamo un valore così basso per il 5-FU.

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