Bonjour, tout le monde. Merci toi pour joindre mon parler. je suis Giulia Lambia, Je suis un Senior Scientifique à AstraZeneca. je travail dans biopharmaceutique développement dans le analytique science équipe. Aujourd'hui, je vouloir toi parler pour vous à propos le utiliser de Biche pour le développement de analytique caractérisation méthodes, pont en particulier chromatographie méthodes.
Dans aujourd'hui parler, Je suis en allant toi parler à propos thérapeutique les protéines, quoi ils sont, et pourquoi ils sont difficile pour analytique essai, et introduire toi toi le utiliser de conception de expérience pour analytique méthode développement et le application de Biche pour le développement de charge variance méthodes, spécifiquement cationique échange chromatographie méthode.
Toi commencer désactivé, protéine thérapeutique sont intrinsèquement très complexe deux toi leur plus grand taille et le présence de la poste- traductionnel modification, et aussi chimique modifications que chien le protéine subir à travers pendant le processus de expression dans cellules, purification, et stockage.
Monoclonal anticorps dominer le biopharmaceutique marché, représentant à propos 70 % de le total ventes de biopharmaceutique des produits. Cependant, récemment, là est un pousser pour nouveau des produits, suivant génération produits biopharmaceutiques, lequel sont bispécifique des anticorps, anticorps fragment, la fusion les protéines, et beaucoup autre formats. Tous de eux comment avec unique défis deux toi leur complexe structure et présence de plus haut commande structure, glyco formes, charge variantes, le sulfate les obligations, oxydé désamidé espèces, l'isomérisation, agrégation, fragmentation.
UN ll de ces modification, chimique processus [inaudible 00:02:37] modification, chien impact M puissance, sécurité, qualité de le final médicament produit. Ce est pourquoi complet analytique caractérisation et analytique essai tout au long de tous le des stages de produit vie faire du vélo est clé toi rencontrer réglementaire normes, toi Bien activé toi livrer un produit que se rencontre réglementaire qualité profil.
Nous utiliser un pléthore de analytique techniques pour en cours d'analyse les protéines, et ces sont basé surtout M chromatographie méthodes, électrophorétique méthodes, et [inaudible 00:03:25] . Deux toi le inhérent de construction complexité de les protéines, analytique méthode développement chien Bien quitter difficile.
Dans aujourd'hui parler, Je suis en allant toi spécifiquement parler à propos chromatographie méthodes et le utiliser de conception de expérience toi aide le développement de chromatographie séparation. Chromatographie méthode chien Bien quitter complexe, en particulier si toi avoir un complexe analyte comme un protéine. Ce est parce que le séparation dépend M le réciproque de plusieurs variables tel comme mobile phase composition, tampon pH, couler les taux, colonne chimie, température, le taper de détecteur que toi décider toi utiliser pour le analyse. Tous de ces paramètres besoin toi Bien bien- à l'écoute et contrôlé pendant le séparation processus dans commande toi atteindre le voulu séparation. Biche chien Bien très utile contre un facteur à un temps approche.
Un facteur à un temps approche impliqué le variation de un paramètres à un temps, maintenir le autre constante. Ce peut plomb toi un large expérimental courir manque de information parce que il y a manque de enquête M facteurs interactions. Laque de information aussi conduit toi supplémentaire expériences pendant méthode validation, lequel peut allonger même plus le méthode développement processus et enfin retard le dans l'ensemble produit développement.
BICHE, dans comparaison toi un facteur à un temps approches, Biche activer le variation de plusieurs paramètres à un temps. Ce permettre avec un réduit nombre de expériences, toi enquêter un large nombre de facteurs, y compris le interaction entre eux. Aussi le développement de mathématique des modèles que permettre le évaluation de pertinence et le statistique importance toi faciliter tous le pas requis pendant méthode validation.Biche activer vraiment toi enquêter un large conception espace avec moins ressources, je suis dans un plus efficace chemin. Dans en fait je comme en disant Biche activer plus rapide, moins cher, et plus intelligent des expériences pour livrer plus forte et mieux analytique méthodes.
Dans le jour d'aujourd'hui parler, Je suis en allant toi parler toi à travers un diviser Biche approche pour le développement de un cation échange chromatographie méthode. Cation échange chromatographie est utilisé pour le analyse de charge variantes. Spécifiquement, si toi voir ici M le gauche main site de ce des diapositives, toi chien voir un chromatogramme de un protéine où toi chien voir quelques acide espèces ici M le gauche, [inaudible 00:07:17] M le gauche de un principal espèces culminer, et quelques basique espèces culminer.
Tous ces acide basique espèces chien Bien formé deux toi le présence de chimique modification que chien plomb toi superficiel charge distribution variation dans le protéine. Cation échange chromatographie méthodes sont quitter complexe chromatographie méthodes parce que le séparation efficacité est affecté par un nombre de facteurs et quitter sensible toi petit changement de ces facteurs tel comme colonne chimie, mobile phase pH, température, couler les taux, heureux de saut, temps de le séparation.
Dans ce approche, Je suis en allant toi parler toi à travers un efficace chemin toi développer cation échange chromatographie méthode en utilisant Biche. Si toi sont familier avec BICHE, toi peut savoir que souvent a besoin un séquentiel approche. Dans ce expérience, je effectué un principal effets dépistage conception pour permettre le sélection de le meilleur colonne chimie et le mobile phase pH pour le charge variance séparation de ce spécifique mAb molécules.
Pendant le deuxième BICHE, je utiliser réponse surface méthodologie, particulièrement un central composite conception BICHE, toi optimiser le chromatographie séparation par en changeant le couler taux et [inaudible 00:09:36] . allons prendre dans plus détail dans le d'abord Biche expérience Ce était un principal effets dépistage conception où je filtré quatre colonne chimie acheté par quatre différent fournisseurs, Agilent, Sepax, Phénoménex, et Les eaux, et je filtré un gamme de pH depuis 5.5 toi 6.5.
Mon réponse était le expérimental culminer capacité, lequel est un paramètres que raconte toi le efficacité de un chromatographique séparation, précisément le nombre de pics que chien Bien séparé dans le chromatogramme, le chromatographie temps que toi sept. Autre paramètres tel comme concentration de tampon, concentration de sauter sur le commencer de le chromatographie pente, couler les taux, pente temps, forme, température, injection volume, concentration, et le UV absorbance étaient gardé constante.
Ces sont le résultats pour le d'abord Biche. Hon le gauche main côtés, toi chien voir le quatre différent colonne résultats. Toi chien voir comment le expérimental culminer capacité changements contre le pH changement dans le mobile phase dans tous le quatre différent Colonnes. Toi chien voir que nous but toi avoir haut expérimental culminer capacité valeurs. Toi chien voir que le Phénomène colonne effectué meilleur.
Dans tous de ces trois Colonnes, nous chien voir que pH de 6.5 activer plus grand expérimental culminer capacités. Mais le Phénomène colonne autorisé pour mieux séparation résultats. Il est aussi visible M le droite main site de ce glisser dans le panneau UN. Toi chien voir à pH 6.5, comment le séparation différer quand en utilisant différent chromatographie Colonnes.
Nous avoir Agilent , Des eaux , Phénomène , et Sépax . Certainement, le séparation de le charge variantes en utilisant le Phénomène colonne est beaucoup mieux que dans le autres parce que ces acide pics sont très Bien séparé comme Bien comme ces basique espèces ici depuis le principal produit culminer.
Panneau B, nous avoir isolé seulement le résultats de le Phénomène colonne. Comment le chromatographie séparation était que avec le mobile phase maintenant avec pH 5.5, 6.0 et 6.5. Nous chien voir comment le séparation améliore avec le augmenter en pH. Bien sûr, le mobile phase pH est dicté par le intrinsèque molécules pi. Nous pourrait seulement enquêter ce gamme. Sinon, le molécules serait avoir lutté toi trouver c'est propre colonne.
Basé M notre fondamental connaissance de chromatographie séparation avec cation échange Colonnes, nous décidé que ce paramètres, je suis ce Phénomène colonne et pH de 6.5, étaient optimal toi porter M développement. Nous porté M avec le deuxième Biche en utilisant un central composite conception.
Central composite conception est un taper de Biche chute dans le parapluie de réponse surface méthodologie, lequel est utilisé pour optimisé conditions pour enquêter le présence de les virages, pour exemple, et extrapoler optimal valeurs. Dans ce Maisons, nous utiliser notre Phénomène colonne et mobile phase pH de 6.5, et commencé toi jouer avec autre paramètres tel comme tampon concentration, concentration de le saut à le commencer de le pente, et couler taux toi enquêter optimal conditions.
Central composite conception activé toi très effectivement, avec un peu nombre de court, toi identifier optimal séparation conditions, optimal méthode conditions. Dans en fait à le très fin de le diviser Biche approche, nous pourrait dire que avec le enquête de quatre Colonnes, mobile phase, pH gamme, saut composition, pente couler taux. Avec seulement 27 expérimental court, nous pourrait optimiser un méthode pour le monoclonal anticorps. Ce méthode est très utile parce que il est maintenant utilisé comme un rapide, haut débit dépistage expérience Dans un rapide, haut débit analytique méthode pour dépistage différences dans le charge variance profil de ces spécifique molécules exprimé dans différent conditions et apparaît il toi un standard.
Toi chien voir ici que le bleu doubler est notre référence standard et le éd doubler est un stresser matériel de le même molécules. Toi chien voir comment le charge variance profil modifié comme un conséquence de le stresser condition appliqué toi ce molécules. Ce était atteint merci toi ce analytique méthode lequel était développé et optimisé avec un Biche approche.
Nous aussi décidé toi mettre en œuvre ce Biche approche comme un plate-forme flux de travail pour analytique méthode développement pour nouveau des produits, nouveau biographie produits pharmaceutiques, et nous filtré un nombre de des produits.Pour tous de eux nous appliqué d'abord le d'abord principal effet écran conception, et nous identifié le meilleur colonne et mobile phase pH toi utiliser Deuxièmement, nous appliqué le central composite conception toi optimiser le séparation.
Maintenant, nous avoir identifié un plate-forme colonne et un mobile phase composition pour ce classe de thérapeutique. Quand nouveau molécules viens dans le pipeline, nous chien très rapidement juste par en utilisant un central composite conception, lequel implique en fait juste 12 court, optimiser le chromatographie profil et livrer un optimale cation échange méthode pour un spécifique produit.
Le clé prendre- maison messages depuis mon parler aujourd'hui est que Biche système méthode développement suivi par approprié statistique analyse activer toi plan expérience basé M temps, coût, et analytique ressources disponible très effectivement, et calendrier le exécution de expériences avec adéquat échantillon taper et taille toi extrapoler le maximum montant de information depuis notre chimique des données et efficacement adresse le défis et objectifs de le censé recherche.
Il certainement vous sauvegardez temps et coût pour expérience exécution dans comparaison toi un facteur à un temps approches. La plupart en particulier, il permet le complexité de analytique méthode développement, mais toujours interroger plusieurs facteur à un temps et étudier le effet de les deux individuel méthode paramètres et le interaction M le dépendant variable.
Avec aujourd'hui parler, je espoir je inspiré toi toi appliquer plus Biche dans ton expériences. Merci toi très beaucoup tout le monde, pour ton attention Si toi avoir n'importe lequel des questions, sentir gratuit toi atteindre dehors toi moi Merci toi.
