Sviluppo di metodi assistiti da DoE per l'analisi di varianti di carica di anticorpi monoclonali mediante cromatografia a scambio cationicoLa cromatografia a scambio cationico (CEX) è il gold standard del settore per l'analisi delle varianti di carica dei biofarmaci come gli anticorpi monoclonali (mAb). Tuttavia, lo sviluppo di metodi CEX in modo efficiente in termini di tempo e risorse costituisce un collo di bottiglia nella caratterizzazione delle proteine. Le separazioni CEX sono complesse e governate da molteplici fattori come la chimica della colonna, il tipo di gradiente, la portata, la composizione della fase mobile e il pH. Diverse pubblicazioni scientifiche hanno dimostrato il successo dell'applicazione del design-of-experiment (DoE) nello sviluppo del metodo cromatografico. Tuttavia, l'esecuzione di DoE con un gran numero di fattori può essere impegnativa, dispendiosa in termini di tempo e costosa. Questo lavoro illustra l'uso di un approccio split-DoE per aiutare lo sviluppo di un metodo CEX per l'analisi del profilo delle varianti di carica di un candidato mAb. Lo sviluppo del metodo analitico aveva lo scopo di fornire un metodo CEX ad alta produttività (HT) per supportare l'analisi delle varianti di carica con requisiti minimi di campionamento e tempo. L'approccio split-DoE si basa sulla conoscenza fondamentale del meccanismo di separazione CEX e mira a ridurre il numero di corse sperimentali mentre si esplora un ampio spazio sperimentale. La modellazione della regressione è stata utilizzata per studiare l'effetto dei singoli parametri di processo e delle loro interazioni sull'efficienza di separazione per identificare infine le condizioni ottimali del metodo. Questo studio fornisce un flusso di lavoro efficiente per sfruttare lo sviluppo di metodi CEX.
Re: Sviluppo di metodi assistiti da DoE per l'analisi di varianti di carica di anticorpi monoclonali mediante cromatografia a scambio cationicoCiao Vittorio,
Hai ragione, il cubo rappresenta una scatola Behnken design (BBD) mentre l'esperimento per la prima molecola riportata nelle slide è stato fatto su un design composito centrale (CCD). Grazie per averlo individuato e mi scuso per l'errore di battitura! BBD è stato utilizzato per ottimizzare i metodi CEX per altre molecole con una zona operativa più ristretta per gli stessi fattori sperimentali. L'approccio split-doe per lo sviluppo del metodo CEX utilizzando un BBD o un CCD nella seconda fase è stato utilizzato per le molecole di cui sono riportate tracce di CEX nella diapositiva 9. CCD utilizzato in alto e BBD utilizzato in basso come secondo DoE. Spero che questo risponda alla tua domanda e mi scuso per la presentazione confusa.
Re: Sviluppo di metodi assistiti da DoE per l'analisi di varianti di carica di anticorpi monoclonali mediante cromatografia a scambio cationicoCIAO @jlmbs ,
Grazie mille per aver condiviso il tuo interessante caso d'uso!
Potrei sbagliarmi, ma penso che il design mostrato sotto Central Composite Design (pagine 5 e 8) sembra più un design Box Benhken con un punto centrale.
Un CCD sarebbe simile a questo: https://www.researchgate.net/profile/Harald-Hetzner/publication/275971176/figure/fig1/AS:614298875359234@1523471673216/Schema-of-a-central-composite-design-with-three-factors-AB- e-C-It-consiste-di-a.png
Nel tuo studio, hai usato un CCD (attraverso l'aumento del design di Main Effects Screening) o un "nuovo" design Box Benhken?
Grazie mille per la tua risposta,
