Die Kationenaustauschchromatographie (CEX) ist der Goldstandard der Industrie für die Analyse von Ladungsvarianten von Biopharmazeutika wie monoklonalen Antikörpern (mAbs). Die zeit- und ressourceneffiziente Entwicklung von CEX-Methoden stellt jedoch einen Engpass bei der Proteincharakterisierung dar. CEX-Trennungen sind komplex und werden von mehreren Faktoren wie Säulenchemie, Gradiententyp, Flussrate, Zusammensetzung der mobilen Phase und pH-Wert bestimmt. Mehrere wissenschaftliche Veröffentlichungen belegen die erfolgreiche Anwendung des Design-of-Experiment (DoE) in der Methodenentwicklung der Chromatographie. Dennoch kann die Durchführung von DoEs mit einer großen Anzahl von Faktoren herausfordernd, zeitaufwändig und teuer sein. Diese Arbeit veranschaulicht die Verwendung eines Split-DoE-Ansatzes zur Unterstützung der Entwicklung einer CEX-Methode zur Analyse des Ladungsvariantenprofils eines mAb-Kandidaten. Die Entwicklung analytischer Methoden sollte eine CEX-Methode mit hohem Durchsatz (HT) bereitstellen, um die Ladungsvariantenanalyse mit minimalem Proben- und Zeitbedarf zu unterstützen. Der Split-DoE-Ansatz basiert auf grundlegendem Wissen über den CEX-Trennmechanismus und zielt darauf ab, die Anzahl der experimentellen Durchläufe zu reduzieren und gleichzeitig einen großen experimentellen Raum zu erkunden. Mittels Regressionsmodellierung wurde der Einfluss sowohl einzelner Prozessparameter als auch deren Wechselwirkungen auf die Trennleistung untersucht, um letztendlich die optimalen Verfahrensbedingungen zu identifizieren. Diese Studie bietet einen effizienten Arbeitsablauf zur Nutzung der Entwicklung von CEX-Methoden.
